Impacto da Infecção por Criptococcus na Ativação transcricional dos Membros do Complexo Inflamossoma NRLP3 Mediada Pela Acetilação das Marcas H3K9 e H3K27 de Células Pulmonares

A criptococose pulmonar representa um desafio clínico significativo tanto para a saúde humana quanto para a animal, devido à sua capacidade de causar infecções graves, especialmente em indivíduos imunocomprometidos. Embora existam estudos que sugerem o envolvimento de mecanismos epigenéticos, como a acetilação de histonas H3K9Ac e H3K27Ac, no controle da expressão dos genes relacionados ao inflamassoma NLRP3, a interação entre Cryptococcus gattii, com diferentes graus de virulência, e células pulmonares humanas ainda permanece pouco compreendida.

Investigar a influência do grau de virulência de Cryptococcus gattii: R265 (VGIIa) e NIH312 (VGIII) na ativação transcricional dos genes codificadores dos membros do inflamossoma NLRP3, mediada pela acetilação das marcas de ativação H3K9 e H3K27 em pneumócitos humanos.

Pneumócitos humanos (H292) serão cultivados sobre substrato colagênico e infectados pelas cepas R265 e NIH312 por 48 horas. Após o período de infecção, a internalização dos microrganismos será determinada pela caracterização histopatológica; a concentração de citocinas inflamatórias do meio condicionado será avaliada por citometria de fluxo; a expressão gênica dos membros do complexo inflamassoma NRLP3 e das enzimas acetiltransferases HAT e PACF será avaliada por RT-PCR; o conteúdo proteico total das marcas H3K9Ac e H3K27Ac será determinado por Western Blotting; e o enriquecimento das marcas H3K9Ac e H3K27Ac na região promotora do gene NRLP3 será avaliado por imunoprecipitação de cromatina seguida de PCR (ChIP-qPCR). Adicionalmente, análises de correlação serão realizadas para investigar se o estado de compactação da cromatina estaria relacionado com a ativação transcricional do gene NLRP3.