Ativação do Inflamassoma NLRP3 na Interface Materno-Fetal em Infecções por Cryptococcus gattii: Papel do Eixo TLR4/NF-κB e da Disfunção da Biogênese Mitocondrial Placentária.

Cryptococcus gattii é um fungo oportunista emergente com pronunciado neurotropismo e capacidade de infectar hospedeiros imunocompetentes, representando risco especial durante a gestação. A interface materno-fetal constitui um microambiente imunologicamente ativo no qual componentes da parede fúngica, em especial a glucuronoxilomanana capsular, podem acionar o receptor TLR4, desencadeando sinalização via NF-κB e promovendo o priming transcricional do inflamassoma NLRP3. Paralelamente, a infecção fúngica compromete a biogênese mitocondrial placentária, com redução da expressão de PGC-1α e TFAM e consequente aumento de espécies reativas de oxigênio de origem mitocondrial (mtROS), que funcionam como sinal 2 endógeno para a ativação plena do NLRP3. Uma vez ativado, esse complexo multiproteico desencadeia clivagem proteolítica da caspase-1, processamento e secreção de IL-1β e IL-18, e clivagem de gasdermina D (GSDMD), induzindo piroptose. Apesar da relevância clínica e epidemiológica, não existem estudos que caracterizem esse eixo TLR4/NF-κB → disfunção mitocondrial → NLRP3 na placenta durante infecção gestacional por C. gattii.

Caracterizar o eixo TLR4/NF-κB → disfunção da biogênese mitocondrial → ativação do inflamassoma NLRP3 na placenta de camundongas C57BL/6 infectadas com Cryptococcus gattii no 9,5º dia pós-coito, por meio da análise da expressão gênica (RT-qPCR) e proteíca (Western Blot) dos componentes centrais desse eixo, em animais imunocompetentes e imunossuprimidos com ciclofosfamida.

Utilização de camundongos fêmeas C57BL/6 gestantes, distribuídos em quatro grupos experimentais: controle, infectado por Cryptococcus gattii, imunossuprimido com ciclofosfamida e imunossuprimido/infectado. A imunossupressão será induzida por ciclofosfamida (100 mg/kg, i.p.) e a infecção realizada no 9,5º dia gestacional por via intravenosa com C. gattii (VGII; 10⁴–10⁵ UFC). As eutanásias ocorrerão nos períodos gestacionais de 11,5 e 17,5 dpc para avaliação de respostas inflamatórias agudas e desfechos gestacionais tardios. Após a coleta das placentas, serão realizadas extrações de RNA e proteínas. A expressão gênica dos componentes do eixo TLR4/NF-κB, biogênese mitocondrial e inflamassoma NLRP3 será avaliada por RT-qPCR, enquanto a expressão proteica e ativação funcional dessas vias serão investigadas por Western Blot. Os dados obtidos serão submetidos à análise estatística utilizando testes paramétricos ou não paramétricos apropriados, considerando significância de p < 0,05.