O Papel do Inflamassoma NLRP3 na Patogênese Inflamatória e Nas Alterações Neurocomportamentais da Meningoencefalite Criptocócica.

A meningoencefalite criptocócica é uma infecção fúngica grave do Sistema Nervoso Central (SNC), associada a elevadas taxas de morbimortalidade e a sequelas neurológicas persistentes. O inflamassoma NLRP3 tem emergido como um sensor crítico da imunidade inata cerebral, porém, seu papel exato na gênese de déficits funcionais precoces permanece pouco elucidado.

Avaliar a influência da via do inflamassoma NLRP3 na progressão da meningoencefalite criptocócica e o papel desse mecanismo no desenvolvimento de alterações neurocomportamentais precoces em modelo murino de infecção intracerebral por Cryptococcus.

Serão utilizados camundongos da linhagem C57BL/6 (C57 Black) submetidos ao modelo de inoculação intracraniana de Cryptococcus gattii. O surgimento de déficits neurocomportamentais precoces será identificado e quantificado por meio de testes comportamentais. A cinética da resposta inflamatória será avaliada pela reatividade microglial e astrocitária, por meio de imuno-histoquímica, no parênquima cerebral. Adicionalmente, a expressão gênica relativa dos componentes do inflamassoma (NLRP3, ASC, Caspase-1) e das citocinas efetoras (IL-1b e IL-18) será quantificada por RT-qPCR no tecido cerebral.

Com a execução deste projeto, esperamos obter resultados relacionados aos seguintes tópicos:

1) Mapeamento das alterações neurocomportamentais: Espera-se que a infecção intracerebral por Cryptococcus induza alterações precoces e progressivas, caracterizadas por redução da atividade exploratória (locomoção), aumento de comportamentos do tipo ansioso e prejuízo na consolidação da memória de curto e longo prazo nos animais infectados; 2) Reatividade Glial: Esperamos que a cinética de ativação ocorra de forma precoce, preceda e/ou coincida com os primeiros sinais de declínio funcional; 3) Perfil de Expressão Gênica: Acreditamos que a infecção irá promover uma regulação positiva (upregulation) significativa na expressão gênica dos componentes centrais do inflamassoma (NLRP3, ASC e Caspase-1), bem como níveis elevados de mRNA para as citocinas pró-inflamatórias IL-1 e IL-18 no tecido cerebral, confirmando o recrutamento dessa via e por fim, 4) Com as análises de correlação mecanísticas (Assinatura Transcricional vs. Função), esperamos estabelecer uma correlação direta entre a intensidade da ativação do inflamassoma NLRP3 e a gravidade dos déficits neurocomportamentais.