Metilação de Histonas como Elo Metabólico-Epigenético na Desmielinização Induzida Pela Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) em Camundongos

A Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) é o modelo animal mais utilizado para mimetizar a fisiopatologia da doença neuro-inflamatória desmielinizante (DND). A falha de remielinização espontânea em lesões crônicas está intimamente relacionada ao bloqueio na diferenciação das células precursoras de oligodendrócitos (OPCs), imposto por distúrbios epigenéticos e por um microambiente inflamatório e de severo estresse oxidativo. Recentemente, demonstrou-se que a perda da marca epigenética ativa de metilação de histonas H3K4me3 em promotores de genes de proteínas estruturais da mielina, como o gene da Proteína Básica da Mielina (Mbp), está associada a distúrbios metabólicos e ao comprometimento bionergético central.

Este projeto propõe um modelo experimental inovador, altamente viável e de baixo custo, para investigar se a suplementação dietética oral com betaína (um aminoácido modificado que atua como doador natural de metila) pode reverter o silenciamento epigenético e atenuar o dano inflamatório e oxidativo in vivo.

Para tanto, fêmeas C57BL/6 de 8 semanas de idade serão submetidas à indução ativa de EAE com o peptídeo MOG35-55 emulsificado em Adjuvante Completo de Freund (CFA) e toxina pertussis. Os animais serão distribuídos em quatro grupos (n = 12 por grupo, subdivididos em dois tempos de eutanásia no 14º e 28º dia pós-indução, DPI): Saudável + Veículo, Saudável + Betaína, EAE + Veículo e EAE + Betaína. A suplementação com betaína 1,5% p/v será feita de forma profilática na água de beber. Serão realizadas avaliações diárias do escore clínico e peso corpóreo. Na eutanásia, coletar-se-á sangue para obtenção de soro e os tecidos de medula espinhal cervical e lombar. Visando à otimização de recursos e menor custo analítico, 3 animais por subgrupo serão destinados à análise morfológica (coloração histológica HE, Luxol Fast Blue para desmielinização e imunoflurescência para CD3, Iba-1 e MBP). Os outros 3 animais serão submetidos à extração simultânea de RNA e proteínas via método de partição com reagente TRIzol, permitindo analisar no mesmo tecido a expressão de Mbp por RT-qPCR e a abundância global de H3K4me3 e MBP por Western Blot. No soro, quantificar-se-á o biomarcador de lise axonal neurofilamento de cadeia leve (sNfL) por ELISA e o perfil de citocinas (IL-6, IL-1β, TNF-α e IL-10) por ensaios imunoenzimáticos. A homeostase redox plasmática e tecidual será aferida por métodos espectrofotométricos clássicos de baixíssimo custo (ferro total, grupos ferro-hemínicos, GSH/GSSG, ácido úrico, carbonilas proteicas e TBARS).