Impacto da Ativação do Inflamassoma NLRP3 na Biologia Placentária e na Sinalização Sonic Hedgehog sobre o Desenvolvimento Embrionário em Infecções por Cryptococcus gattii e Encephalitozoon cuniculi

As zoonoses oportunistas representam um desafio significativo para a saúde global, especialmente para gestantes imunocomprometidas. Cryptococcus gattii e Encephalitozoon cuniculi são patógenos oportunistas emergentes com potencial de transmissão vertical, mas seus efeitos sobre a placenta e o neurodesenvolvimento embrionário, bem como o papel do inflamassoma NLRP3 nesse contexto, permanecem inexplorados. A via Sonic Hedgehog (Shh), essencial para o desenvolvimento do sistema nervoso central, pode ser alvo da inflamação placentária mediada por NLRP3.

Avaliar o impacto das infecções por C. gattii e E. cuniculi no 9,5º dia de gestação em camundongos imunocompetentes e imunossuprimidos com ciclofosfamida, investigando a ativação do inflamassoma NLRP3 na placenta, suas consequências para o neurodesenvolvimento mediadas pela via Shh e validando o mecanismo por knockout genético (NLRP3-/-) e inibição farmacológica da via Shh com Vismodegib (GDC-0449).

Para isso, camundongas C57BL/6 gestantes serão distribuídas em 11 grupos experimentais: controles, infectados com C. gattii, infectados com E. cuniculi, seus respectivos controles e infectados submetidos à imunossupressão com ciclofosfamida (100 mg/kg, i.p., duas doses), camundongos knockout NLRP3-/- e grupos tratados com Vismodegib (GDC-0449, 100 mg/kg/dia, v.o., do 7,5 ao 10,5 dpc). As infecções serão realizadas por via intravenosa no 9,5 dpc. Eutanásias ocorrerão no 11,5 dpc (resposta inflamatória aguda) e no 17,5 dpc (desfechos gestacionais e neurodesenvolvimento). As análises incluirão carga parasitária/fúngica (qPCR), ativação do NLRP3 (qPCR, Western Blot, ELISA), via Shh (imunohistoquímica, Western Blot, qPCR), morfologia do SNC fetal, transcriptoma e lipidômica placentária.

Espera-se que ambos os patógenos ativem o NLRP3 na placenta, com maior intensidade nos imunossuprimidos, correlacionando-se com o aumento da reabsorção embrionária, a restrição do crescimento e a desregulação da via Shh no SNC fetal. Camundongos NLRP3-/- infectados deverão apresentar menor dano gestacional e preservação da via Shh. Grupos tratados com Vismodegib deverão apresentar agravamento dos déficits de neurodesenvolvimento, confirmando a via Shh como um efetor crítico da inflamação placentária mediada por NLRP3. Este projeto poderá elucidar os mecanismos pelos quais a inflamação placentária mediada por NLRP3 compromete o neurodesenvolvimento embrionário via desregulação da via Sonic Hedgehog, além de validar abordagens genética e farmacológica, abrindo perspectivas para intervenções terapêuticas na prevenção de perdas gestacionais e sequelas neurológicas associadas a infecções oportunistas.